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18. 2 Principle of FACE/Gel Retardation Assay . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 349 18. 3 Labelling
of Oligosaccharides with ANTS . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . 350 18. 4 Screening of Carbohydrate
Ligands for Proteins . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . 352 18. 5 Measurement of Binding Constant for the
Interaction Between Protein and ANTS-Labelled Carbohydrate . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. 355 18. 6 Measurement of Binding Constant for the Interaction
Between Protein and Native Carbohydrate . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . 357 References . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . 360 ~ The Application of Capillary Affinity Electrophoresis
to the Analysis _ of Carbohydrate-Protein Interactions . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 361 19.
1 Introduction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
361 19. 2 Principle of CAE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. 363 19. 3 Determination of Association Constants . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 364 19. 4
Technical Procedures . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 366 General
considerations . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 366 19. 5 Limitations
of the Technique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 370 19. 6 Application of CAE
to the Analysis of Carbohydrate-Protein Interactions . . . . . .
371 19. 7 Conclusions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . 375 References . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . 377 20. 1 Introduction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . 379 Definitions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . 380 20. 2 Technical Procedures . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . 381 20. 3 Sample Detection and Sample Recovery . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 389
Autoradiography and staining . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 389 Sample
detection by blotting . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 389 Semipreparative ACE .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . 390 20. 4 Analysis of Data . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . 391 Measuring sample mobilities -
calculating a retardation coefficient . . . . . . . . . . . . 391
Graphical analysis of data . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 392
Interpreting ACE patterns . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 393 Reverse ACE
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 395 20. 5 Summary .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 397
Acknowledgements . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 398
References . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 398
Subject Index . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 399 XII
List of Contributors Nebojsa Avdalovic John T. Gallagher Dionex
Corporation Cancer Research Campaign Department of Medical Oncology
445 Lakeside Drive University of Manchester Sunnyvale, CA 94086
Christie CRC Research Centre Klaus Biemann Wilmslow Road Department
of Chemistry Manchester M20 4BX Massachusetts Institute of
Technology UK Cambridge, MA 02139-4307 USA Geoffrey R.
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